西藏液相色谱常用指南 武汉赛尔夫

液相色谱仪与气相色谱仪的区别：

　　1．分析对象的区别

　　GC：适于能气化、热稳定性好、且沸点较低的样品；但对高沸点、挥发性差、热稳定性差、离子型及高聚物的样品，尤其对大多数生化样品不可检测占有机物的20%

　　HPLC：适于溶解后能制成溶液的样品(包括有机介质溶液)，不受样品挥发性和热稳定性的限制，对分子量大、难气化、热稳定性差的生化样品及高分子和离子型样品均可检测用途广泛，占有机物的80%

　　2．流动相差别的区别

　　GC：流动相为惰性，气体组分与流动相无亲合作用力，只与固定相有相互作用。

　　HPLC：流动相为液体，流动相与组分间有亲合作用力，能提高柱的选择性、改善分离度，对分离起正向作用。且流动相种类较多，选择余地广，改变流动相极性和pH值也对分离起到调控作用，当选用不同比例的两种或两种以上液体作为流动相也可以增大分离选择性。HPLC：流动相为液体，流动相与组分间有亲合作用力，能提高柱的选择性、改善分离度，对分离起正向作用。

柱压高⑴缓冲液盐分如（铵等）沉积于柱内；处理工作中注意观察流动相的量，保证不锈钢滤器沉入储液器瓶底，避免吸入空气，流动相要充分脱气。⑵样品污染沉积。处理对于种情况先用40～50℃的纯水，低速正向冲洗柱子，待柱压逐渐下降后，相应提高流速冲洗，柱压大幅度下降后，用常温纯水冲洗，之后用纯冲洗柱子30分钟；对于第二种情况，由样品的沉积引起污染的C18柱，和纯水反向冲洗柱子，换成冲洗，接着用+异（4+6）冲洗柱子，再用换成冲洗，然后用纯水冲洗，后冲洗正向冲洗柱子30分钟以上。无指示⑴泵密封垫圈磨损；⑵大量气泡进入泵体。处理对于种情况，更换密封垫圈；对于第二种情况，在泵作用的同时，用一个50ml的玻璃针筒在泵的出口处帮助抽出空气。不稳定原因系统中有空气或者单向阀的宝石球和阀座之间夹有异物，使得两者不能密封。处理工作中注意观察流动相的量，保证不锈钢滤器沉入储液器瓶底，避免吸入空气，流动相要充分脱气。如为单向阀和阀座之间夹有异物，拆下单向阀，放入盛有的烧杯用超声波清洗。

液相色谱仪的保养维护与气相色谱仪没有多大区别，液相色谱仪的几个维护保养的部件，液相色谱仪的主要部件有色谱柱、进样器、检测器、泵，下面我们分别来说明这几大部件的保养维护方面。

色谱柱大家都不陌生，是我们做分析的必需品，无论是液相色谱仪还是气相色谱仪都离不开色谱柱。色谱柱是化合物分离的关键，我们在安装时要保证阀件管路的清洁，并且不能碰撞、弯曲或强烈震荡色谱柱，在长期不使用色谱柱的时候要用保存封闭，分析结束后要用流动相或适当的溶剂清洗色谱柱，流动相在使用前必须进行脱气处理，尽量不使用或少使用高粘度的流动相，在满足灵敏度的前提下，尽可能的使用小进样量。如果样品比较脏，要进行净化或提纯处理。进样器是液相色谱仪的主要部分之一，我们也要定期进行维护工作。液相色谱仪的检测器在每次分析完成要立即关闭。这就是在配制流动相时造成的细菌污染的原因，解决它的方法很简单，就是确保水的可靠性。 泵是液相色谱仪的心脏，我们要定期维护保养，这样才能使得其处于状态，能报保证基线平稳，保留时间重现性好，梯度洗脱时压力变化缓慢而且平稳。

HPLC与经典液相色谱相比有以下优点：

速度快—通常分析一个样品在15~30 min，有些样品甚至在5 min内即可完成。

分辨率高—可选择固定相和流动相以达到分离效果。

灵敏度高—紫外检测器可达0.01ng，荧光和电化学检测器可达0.1pg。

柱子可反复使用—用一根色谱柱可分离不同的化合物。

样品量少，容易回收—样品经过色谱柱后不被破坏，可以收集单一组分或做制备。